Mae hidlydd fflworoleuedd yn elfen hanfodol mewn microsgop fflworoleuedd. Mae gan system nodweddiadol dri hidlydd sylfaenol: hidlydd excitation, hidlydd allyriadau a drych deucroig. Maent yn aml yn cael eu pecynnu mewn ciwb fel bod y grŵp yn cael ei fewnosod gyda'i gilydd yn y microsgop.
Sut mae hidlydd fflworoleuedd yn gweithio?
Hidlydd cyffro
Mae hidlwyr cyffro yn trosglwyddo golau o donfedd benodol ac yn rhwystro tonfeddi eraill. Gellir eu defnyddio i gynhyrchu gwahanol liwiau trwy diwnio'r hidlydd i ganiatáu dim ond un lliw drwodd. Daw'r hidlwyr excitation mewn dau brif fath - hidlwyr pas hir a hidlwyr pas band. Mae'r exciter fel arfer yn hidlydd bandpass sy'n pasio dim ond y tonfeddi a amsugnir gan y fflworoffor, gan leihau cyffro ffynonellau eraill o fflworoleuedd a rhwystro golau cyffro yn y band allyrru fflworoleuedd. Fel y dangosir gan y llinell las yn y ffigur, BP yw 460-495, sy'n golygu mai dim ond trwy fflworoleuedd 460-495nm y gall basio.
Fe'i gosodir o fewn llwybr goleuo microsgop fflworoleuedd ac mae'n hidlo holl donfedd y ffynhonnell golau ac eithrio'r ystod excitation fflworoffor. Mae isafswm trosglwyddiad yr hidlydd yn pennu disgleirdeb a disgleirdeb delweddau. Argymhellir trosglwyddiad o leiaf 40% ar gyfer unrhyw hidlydd cyffro fel bod y trosglwyddiad yn ddelfrydol >85%. Dylai lled band yr hidlydd excitation fod yn gyfan gwbl o fewn yr ystod excitation fluorophore fel bod tonfedd canol (CWL) yr hidlydd mor agos â phosibl i donfedd excitation brig y fflworoffor. Mae dwysedd optegol hidlydd excitation (OD) yn pennu tywyllwch y ddelwedd gefndir; Mae OD yn fesur o ba mor dda y mae hidlydd yn blocio'r tonfeddi y tu allan i ystod trawsyrru neu led band. Argymhellir o leiaf OD o 3.0 ond mae OD o 6.0 neu fwy yn ddelfrydol.
Hidlydd Allyriadau
Diben hidlwyr allyriadau yw caniatáu i'r fflworoleuedd dymunol o'r sampl gyrraedd y synhwyrydd. Maent yn rhwystro tonfeddi byrrach ac mae ganddynt drosglwyddiad uchel am donfeddi hirach. Mae'r math hidlydd hefyd yn gysylltiedig â nifer, ee BA510IF yn y ffigur (hidlo rhwystr ymyrraeth), mae'r dynodiad hwnnw'n cyfeirio at y donfedd ar 50% o'i drosglwyddiad uchaf.
Mae'r un argymhellion ar gyfer hidlwyr cyffro yn wir ar gyfer hidlwyr allyriadau: isafswm trosglwyddiad, lled band, OD, a CWL. Mae hidlydd allyriadau gyda'r CWL delfrydol, y trosglwyddiad lleiaf, a'r cyfuniad OD yn darparu'r delweddau mwyaf disglair posibl, gyda'r blocio dyfnaf posibl, ac yn sicrhau bod y signalau allyriadau lleiaf yn cael eu canfod.
Drych Dichroic
Mae'r drych deucroig yn cael ei osod rhwng yr hidlydd excitation a'r hidlydd allyriadau ar ongl 45 ° ac mae'n adlewyrchu'r signal cyffro tuag at y fflworoffor wrth drosglwyddo'r signal allyriadau i'r synhwyrydd. Mae gan hidlwyr deucroig delfrydol a holltwyr trawst drawsnewidiadau sydyn rhwng yr adlewyrchiad mwyaf a'r trosglwyddiad mwyaf, gydag adlewyrchiad > 95% ar gyfer lled band yr hidlydd cyffro a throsglwyddiad o >90% ar gyfer lled band yr hidlydd allyriadau. Dewiswch yr hidlydd gyda thonfedd croestoriad (λ) y fflworoffor mewn golwg, i leihau golau crwydr a chynyddu'r gymhareb signal-i-sŵn delwedd fflwroleuol.
Y drych deucroig yn y ffigur hwn yw'r DM505, a enwir felly oherwydd 505 nanometr yw'r donfedd ar 50% o'r trosglwyddiad uchaf ar gyfer y drych hwn. Mae'r gromlin drosglwyddo ar gyfer y drych hwn yn dangos trosglwyddiad uchel uwchlaw 505 nm, gostyngiad serth mewn trosglwyddiad i'r chwith o 505 nanometr, ac adlewyrchedd uchaf i'r chwith o 505 nanometr ond efallai y bydd rhywfaint o drosglwyddiad o dan 505 nm o hyd.
Beth yw'r gwahaniaeth rhwng hidlwyr pas hir a phas band?
Gellir rhannu hidlwyr fflworoleuedd yn ddau fath: pas hir (LP) a phas band (BP).
Mae hidlwyr pas hir yn trosglwyddo tonfeddi hir ac yn rhwystro'r rhai byrrach. Y donfedd torri yw'r gwerth ar 50% o'r trosglwyddiad brig, ac mae'r holl donfeddi uwchben y toriad yn cael ei drosglwyddo gan yr hidlwyr pas hir. Fe'u defnyddir yn aml mewn drychau deucroig a hidlwyr allyriadau. Dylid defnyddio hidlwyr llwybr hir pan fo'r cais yn gofyn am y casgliad mwyaf o allyriadau a phan nad yw gwahaniaethu sbectrol yn ddymunol neu'n angenrheidiol, sy'n gyffredinol yn wir am chwilwyr sy'n cynhyrchu un rhywogaeth sy'n allyrru mewn sbesimenau â lefelau cymharol isel o awtofflworoleuedd cefndirol.
Mae hidlwyr pas band yn trosglwyddo band tonfedd penodol yn unig, ac yn rhwystro eraill. Maent yn lleihau crosstalk trwy ganiatáu dim ond y rhan gryfaf o'r sbectrwm allyriadau fflworoffor i gael ei drosglwyddo, yn lleihau sŵn awtofflworoleuedd ac felly'n gwella'r gymhareb signal-i-sŵn mewn samplau autofluorescence cefndir uchel, na all hidlwyr pas hir eu cynnig.
Sawl math o setiau hidlo fflworoleuedd y gall BestScope eu cyflenwi?
Mae rhai mathau cyffredin o hidlwyr yn cynnwys hidlwyr glas, gwyrdd ac uwchfioled. Fel y dangosir yn y tabl.
| Hidlo Set | Hidlydd cyffro | Drych Dichroic | Hidlydd Rhwystr | Hyd tonnau lamp LED | Cais |
| B | BP460-495 | DM505 | BA510 | 485 nm | · FITC: Dull gwrthgorff fflwroleuol · Oren asidin: DNA, RNA ·Auramine: bacillus twbercwl ·EGFP, S657, RSGFP |
| G | BP510-550 | DM570 | BA575 | 535nm | ·Rhodamine, TRITC: Dull gwrthgorff fflwroleuol · Propidium ïodid: DNA ·RFP |
| U | BP330-385 | DM410 | BA420 | 365nm | ·Awto-fflworoleuedd arsylwi · DAPI: staenio DNA ·Hoechest 332528, 33342: a ddefnyddir ar gyfer staenio Cromosomau |
| V | BP400-410 | DM455 | BA460 | 405nm | ·Catecholamines ·5-hydroxy tryptamine ·Tetracycline: Sgerbwd, Dannedd |
| R | BP620-650 | DM660 | BA670-750 | 640 nm | ·Cy5 ·Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 647 |
Mae setiau hidlo a ddefnyddir mewn caffaeliadau fflworoleuedd wedi'u cynllunio o amgylch y prif donfeddi a ddefnyddir mewn cymwysiadau fflworoleuedd, sy'n seiliedig ar y fflworofforau a ddefnyddir fwyaf. Am y rheswm hwn, maent hefyd yn cael eu henwi ar ôl y fflworoffor y maent wedi'u bwriadu ar gyfer delweddu, megis ciwbiau hidlo DAPI (glas), FITC (gwyrdd) neu TRITC (coch).
| Hidlo Set | Hidlydd cyffro | Drych Dichroic | Hidlydd Rhwystr | Hyd tonnau lamp LED |
| FITC | BP460-495 | DM505 | BA510-550 | 485 nm |
| DAPI | BP360-390 | DM415 | BA435-485 | 365nm |
| TRITC | BP528-553 | DM565 | BA578-633 | 535nm |
| FL-Auramine | BP470 | DM480 | BA485 | 450 nm |
| Coch Texas | BP540-580 | DM595 | BA600-660 | 560 nm |
| mCherry | BP542-582 | DM593 | BA605-675 | 560 nm |
Sut ydych chi'n dewis hidlydd fflworoleuedd?
1. Yr egwyddor o ddewis hidlydd fflworoleuedd yw gadael i'r fflworoleuedd / golau allyrru fynd trwy'r diwedd delweddu cyn belled ag y bo modd, a rhwystro'r golau cyffroi yn llwyr ar yr un pryd, er mwyn cael y gymhareb signal-i-sŵn uchaf. Yn enwedig ar gyfer cymhwyso excitation multiphoton a chyfanswm adlewyrchiad mewnol microsgop, bydd y sŵn gwan hefyd yn achosi ymyrraeth fawr i'r effaith ddelweddu, felly mae'r gofyniad am gymhareb signal i sŵn yn uwch.
2. Gwybod sbectrwm cyffro ac allyriad y fflworoffor. Er mwyn adeiladu set ffilter fflworoleuedd sy'n cynhyrchu delwedd o ansawdd uchel, cyferbyniad uchel gyda chefndir du, dylai hidlwyr cyffro ac allyriad gyflawni trosglwyddiad uchel gyda band pas bach yn crychdonni dros y rhanbarthau sy'n cyfateb i uchafbwynt neu allyriadau cyffro fflworoffor.
3. Ystyriwch wydnwch hidlwyr fflworoleuedd. Rhaid i'r hidlwyr hyn fod yn anhydraidd i ffynonellau golau dwys sy'n cynhyrchu golau uwchfioled (UV) a allai arwain at “losgi”, yn enwedig yr hidlydd exciter gan ei fod yn destun dwyster llawn y ffynhonnell goleuo.
Y Delweddau Sampl Fflwroleuol Gwahanol
Cesglir a threfnir yr adnoddau ar y Rhyngrwyd, a dim ond ar gyfer dysgu a chyfathrebu y cânt eu defnyddio. Os oes unrhyw dor-rheol, cysylltwch â ni i ddileu.
Amser post: Rhag-09-2022